发布日期： 2025-04-16 17:24:57 来源：新闻中心
和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具备极高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样做才能够减少去除血清对细胞的损伤。转染后
Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂以无菌的液体形式提供。通常情况下对于24孔板转染，每次用1.5 L左右，则1 mL约可做660次转染；对于6孔板，每次用6 L左右，则1 mL约可做160次转染。
冰袋（wet ice）运输。产品2-8C保存，一年有效。不可冷冻！
1. Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以60%-80%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响，具体铺板密度需要预实验摸索；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最优选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2. Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM就不相容。
4.使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5.阳离子脂质体应该在2-8C保存，要注意避开多次反复长时间开盖，因为有几率会使脂质体氧化而影响转染效率。
6.初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。DNA和转染试剂的比例，通常推荐是1:2-1:3，比如24孔板内接种0.5-2×105个细胞，使用0.5gDNA和1-1.5L转染试剂。通过调整DNA/Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂比例优化转染效率，DNA（g）:试剂（L）比值在1:0.5-1:5。
【注】：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度来优化最佳使用量。
贴壁细胞：转染前一天（20-24小时），胰酶消化细胞并计数，细胞铺板（不含抗生素），使其在转染时密度为70-95%（0.5-2×105cells/well for a 24-well plate）。
悬浮细胞：转染当天，配制DNA复合物之前，24孔板中细胞铺板，每500L生长培养基（不含抗生素）中加入4-8×105cells。
1.按照以系配制DNA-Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂复合物：
Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂稀释后室温孵育5 min（在30 min内同稀释的DNA混合，保温时间过长会降低活性）
【注意】：即使脂质体核酸转染试剂使用41405ES Hieff®Optimal-MEM 培养基稀释，细胞也能够正常的使用DMEM培养。如果DMEM作为脂质体核酸转染试剂的稀释液，必须在5 min内同稀释的DNA混合。
2.混合稀释的DNA和稀释的脂质体核酸转染试剂（总体积100L），轻轻混匀，并在室温（15-25℃）孵育20 min，使得DNA-脂质体复合物形成。此时溶液可能会混浊，但不会影响转染。
【注意】：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为500L无血清培养基。
4. 37℃，5% CO2培养箱培养24-48 h，直至进行转基因表达分析，无需去掉复合物或更换培养基。然而，可能有必要在4-6 h后更换生长培养基，不会降低转染活性。
稳转细胞株：转染24 h后，按照1:10或更高比例在细胞中加入新鲜生长培养基，转染48 h后加入筛选培养基。
悬浮细胞株：在细胞中加入DNA-Hieff Trans®复合物后，若需要可以4 h后加入PMA和/或PHA。对于Jurkat细胞，PHA和PMA的终浓度分别为1 g/mL和50 ng/mL，能大大的提升CMV启动子活性和基因表达。对于K562细胞，只加入PMA足以提高启动子活性。
对于不同的细胞培养板，Hieff Trans®脂质体核酸转染试剂、DNA、细胞和培养基的使用量会不一样，具体请参考下表（表一）。对于96孔板培养，不需要提前一天进行细胞铺板，可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H，293-F，COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得脂质体核酸转染试剂非常适用于96孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。
表一在不同的培养容器中转染，脂质体核酸转染试剂，核酸，细胞和培养基的用量
【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件来优化。使用时DNA（g）:Hieff Trans®（L）比值保持在1:0.5-1:5
A：有些细胞如293T、293FT、Hela等转染效率基本在85%以上；所有阳离子脂质体转染试剂对细胞都会存在一定的毒性，但是我们公司的转染试剂经过配方优化后其毒性大幅度的降低，且转染效率也有进一步提升。
A：对于换液可以区分两种情况；1、转染之前如果没有换液应在转染 6 小时左右后换液，以保证细胞生长所需营养，2、如果转染之前如果有换液，可根据平时等到培养基出现营养不足时换液。
A:单转效率对于验证过的细胞效率都是很好，可以借鉴FAQ-验证过的细胞系，对于共转由于要涉及到质粒的混合比例和质粒与转染试剂的添加比例问题，因此具体的效率需要做相应的验证。
A:不可以冻存，因为转染试剂是一种脂质体阳离子转染试剂，由于脂质体是不能在低温下冻存，因此转染试剂最好是4度储存，保持最好的转染效能。
A：不需要。脂质体复合物可以稳定存在 6 个小时。如果在进行转染前不进行细胞换
液，为了能够更好的保证细胞正常生长所需的营养，需要在 4～6 小时后换用新的培养基。但如果转染之前已进行过换液则在脂质体转染后不有必要进行再次换液。
A：40802产品做的工艺优化，纯度增高，相应的转染效率也随之变高，建议质粒与转染试剂的比例在1:2做调整，如果出现细胞死亡的现象，降低转染试剂比列。或者转染6h后进行换液。
Q: 如果是悬浮细胞的话，可以不换直接将核酸转染试剂复合物添也，加到培养基中吗?
A: 做悬浮细胞转染的时候，会在前一天进行细胞传代，比如用T25传代，转染当天，依据使用的孔板类型，细胞计数后，吸取对应细胞量加入孔板中，然后补新鲜培养基至一定体积就可以，这样一个时间段就可以直接把转染复合物加进去。